El guardia de seguridad nocturno Larry Daley se ve obligado a despedirse de todos sus amigos cuando los responsables del Museo de Ciencias Naturales de Nueva York deciden hacerlo más 'interactivo', sustituyendo todas las figuras por hologramas. Sus amigos históricos son empaquetados y enviados a los archivos del Smithsonian, en Washington, el museo más grande del mundo.